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  Valutazione di un nuovo sistema per 1'antibiogramma colorimetrico dei Micoplasmi urogenitali      
      BROCCO S., PANDOLFI A., RUGGERI S. Laboratorio Analisi Cliniche e Micrbiologiche CLINI.LAB Srl, Via Adriatica 50, 64026 ROSETO DEGLI ABRUZZI (TE)            
                                             
INTRODUZIONE          
  lAIBS'LIA I

  Schema Belle reazioni
     
Le infezioni cervico-vaginali e uretrali rappresentano un problema di ampia incidenza in età feconda, di frequente attribuibili alla presenza di micoplasmi urogenitali. In particolare Mycoplasma hominis (Mh) ed Ureaplasma urealyticum (Uu) sono stati associati, con maggiore o minore evidenza eziopatogenetica, ad un'ampia varietà di condizioni cliniche: uretriti, prostatiti, malattia infiammatoria pelvica, infertilità, etc.    
 
  Colore riei hozzclti
  Crescita batterica
  Interhrelazioni
 
 
  (perooniantibiot.)
  C C
   
 
  Giallo/giallo
  - -
  S = sensibile
 
 
  Arancio/biallo
  +/- -
  h9-S. = media scnsih.
 
 
  Rosso/giallo
  + -
L.S. = liege sensib.  
Nello studlio presentiamo i risultati di una sperimentazione condotta nel nostro laboratorio nel corso di sei mesi su tamponi vaginali risultati positivi per la presenza di Mh e/o Uu. Sul materiale selezionato è stato sperimentato il nuovo sistema colorimetrico, ATR-7 micoplasmi, per I'esecuzione dell'antibiogramma.  
  Rosso/arancio
F +/
  M.R. = media resist.
 
 
  Rosso/rosso
  + +
  R. = rcsistente
 
 
  GIALL.O/ROSSO
  + -
rest non confornle  
                                 
  c = balsa concentrazione anlibiotica C.' = alts concentrazione antibiotics            
              - = assenza ili crescita batterica (giallo) + - Crcscila ballcrica (rosso)          
MATERIALI E METODI                
      +/-= debole crcscita batterica (arancio)          
                       
I campioni processati provenivano dall'esecuzione ambulatoriale di tamponi cervico-vaginali da donne prevalentemente in età feconda affette da cervico-vaginite.                                    
La ricerca dei Micoplasmi veniva eseguita seminando direttamente il materiale clinico su Kit Micoplasma - test (Liofilchem-Bouty). Esso è costituito da brodo di arricchimento, terreno agarizzato su piastra (per I'isolamento e la conta delle colonie) e test arginina, urea e glucosio per I'identificazione. Sui campioni risultati positivi per Mh o Uu, indipendentemente dal valore di cut-off attualmente consigliato dagli Autori fraricesi (10° UFC), sono stati eseguiti gli antibiogrammi utilizzarndo il nuovo sistema colorimetrico ATR-7 micoplasmi. Il sistema è costituito da una piastra a 18 pozzetti contenenti sei antibiotici a doppia concentrazione:                                  
         
                                 
tetraciclina (pozz. 1-2, 4-8 fig/ml), perfloxacina (pozz. 3-4, 8-16 pghnl), clindamicina (pozz. 5-6, 8-16 fig/ml), lincomicina (pozz. 7-8, 2-4 pg/ml), eritromicina (pozz. 9-10, 8-16 pg/ml), claritromicina (poz. 11-12, 8-16 fig/ml), controllo (pozz. 13-14), norfloxacina (pozz. 15-16 5-10 pg/ml) e 4 pozzetti liberi per il saggio di altri antibiotici.          
                       
                           
                                   
                 
L'antibiogramma viene eseguito prelevando 50 microlitri di brodo di arricchimento per Micoplasmi (precedentemente incubato a 37° C per 24 ore con materiale clinico da analizzare) sospendendoli nel brodo di inoculo. Vengono, quindi, trasferiti 200 microlitri della sospensione in ciascun pozzetto del sistema che verrà ricoperto con olio di vasellina sterile. Dopo 24-48 ore di incubazione sarà possibile osservare il viraggio del colore dei pozzetti controllo (rosso o rosso fucsia) e quindi interpretare i risultati. La presenza dei Micoplasmi, e quindi la resistenza all'antibiotico, viene evidenziata con il viraggio del brodo verso il rosso per I'utilizzo dell'urea e/o arginina. La sensibilità viene evidenziata dal colore giallo del pozzetto (assenza di crescita dei micoplasmi) (tabella 1, figura I).                                    
                             
                                   
    RISULTATI                        
    Dal' 1 aprile 1993 al 30 setternbre 1993 sono state eseguite 100 culture per la ricerca di Mh e Uu da tampone cervicovagirlale di cui 35 sono risultate positive (35%). In particolare 32 colture positive per Uu (91.4%) e 3 casi per positività
             
                                             
A111 -u c(,rl ,icr,,O ir~uit)NALL AfvIt-n                     r,u:   (fAI Hn, A~.111') 1,in.ItKO2 AWr0 1 )-

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                                    Picture    
      Picture                  
        Mh ; Uu 376            
                       
                UU 3276                    
                                       
FIGURA II                              
Frequenza di i.solamento di micoplasnri rrrr;genitali                  
                                                       
                                        8.   t3.i. C R.-~          
    Picture                        
                                 
            FIGURA IV                  
            Ureaplasma urealpticurn, Micoplasma hominis: sensibilità agli antibiotici    
                                 
            DISCUSSIONE              
            II nostro studio sulla sensibilità dell'Mh e Uu agli antibiotici ha evidenziato una spiccata attività della tetraciclina e claritromicina sia nei confronti di Mh e Uu. II sisterma da noi valutato, inoltre, si è rnostrato sensibile, specifico e rapido ponendosi quindi come un ottimo ausilio per la refertaziorie rapida tale da consentire al clinico un intervento terapeutico adeguato nei casi di infezione da Micoplasmi urogenitali.
                                 
            BIBLIOGRAFIA DI RIFERIMENTO        
                                 
                                    Gaudin O(:. Infections hurnaines a' mycoplasnws. Encyclopedie Medico - Chirurgicale, 8039 V 10.      
        Picture                          
                                               
                                    Quentin C et al. Scnsibilite aux antibiotiyucs (ICS nrycoplasmcs pathogcnes pour I'Itornrne. Pathol Itiol 1985: 33:205.    
FIGURA III                              
Ureaplasma nrealt'tic'rnrt: sert,cibilitn agli antibiotici                  
                                 
                                    Taylor - Robinson D. Ureaplasma urealoicvm (T - strain Mycoplasrna) and MYcophrsma hontini.c. In: Mandell UI,, Douglas RG, Bennett JE: Principles and practice of infections disease. Wiley Medical (Ed) 1985: 107(1.  
mista Mh e Uu (8.60,'0 (figura II).                                          
                      Taylor - Robinson I). The genital mycoplasmes. N Engl J Med 1980; 302:1003.    
Gli antibiogrammi vengono eseguiti su tutti i campioni risultati positivi sia da coltura su brodo che su agar. Nelle figure III e IV vengor)o riportati i risultati dello studio sulla sensibilità agli antibiotici ottenuti da campioni positivi per Uu (figura 111) e Mh e Uti (figura IV).          
                         
Possiamo riassumere schematicamente la reazione dell'Uu ai vari antibiotici in ordine di sensibilità decrescente: tetraciclina > claritrornicina > eritromicina --- clindamiciria > pefloxacina > norfloxacina > lincomicina.                          
  Nel caso di infezione mista Mh/Uu:                                      
tetraciclina > claritromicina = clindamicina > eritromicina = norfloxacina>- pefloxacina = lincomicina.                          
                                                       
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